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NADH-谷氨酸合成酶(NADH-GOGAT)試劑盒

貨號:G0403W
規(guī)格:
檢測方法:微板法(內(nèi)送酶標(biāo)板)
檢測儀器:酶標(biāo)儀
促銷價:
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產(chǎn)品介紹

   谷氨酸合成酶(GOGAT)廣泛分布于植物中,植物吸收的無機氮經(jīng)硝酸還原糖(NR)和亞硝酸還原酶(NIR)還原成 NH4+后,通過谷氨酰胺合成酶(GOGAT)參與的 GS/GOGAT 途徑才能進行氮素的同化和利用。GOGAT 一般包含兩類:一類是多存在于葉綠體(葉片)中的 Fd-GOGAT,另一類是多存在于非綠色組織(根)前質(zhì)體中的NADH-GOGAT

        NADH-谷氨酸合成酶NADH-GOGAT,EC 1.4.1.14)催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸,形成兩分子的谷氨酸;同時 NADH 氧化生成 NAD+,可以通過檢測 340nm 吸光度的下降速率得出 NADH-GOGAT的酶活性大小。

    該酶催化的反應(yīng):L-glutamine + 2-oxoglutarate + NADH + H+=2 L-glutamate + NAD+

所需實驗用品

      酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液器、天平、低溫離心機

常見問題

1、試劑盒的運輸
    生化試劑盒一般采用冰袋運輸;運輸中冰袋已融化并不會影響其質(zhì)量,請放心使用。
2、試劑盒的保存:
    收到后,請在預(yù)實驗前及時確認(rèn)各組分量是否與說明書標(biāo)注的一致,若有疑問請及時與我們技術(shù)聯(lián)系(聯(lián)系方式見說明書右下方),拆開包裝后,請按照每個試劑的保存溫度保存。
3、試劑盒有效期
     試劑盒大標(biāo)簽上顯示試劑盒有效期,一般是3個月或6個月(具體以大標(biāo)簽為準(zhǔn))。粉體試劑加溶液后的保存周期,可參照說明書中“備注”一欄的說明(也可聯(lián)系說明書下方的技術(shù)支持咨詢確認(rèn))。
4、預(yù)實驗五步法
    強烈建議客戶選取2-3個預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)測定。
    目的:了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗樣本和試劑浪費!
    第一步:將試劑盒內(nèi)的紙質(zhì)版說明書通讀一遍,核查試劑數(shù)量、狀態(tài)(粉體、液體)及各組份的量與說明書是否一致,若無異常則按照規(guī)定溫度存放。
    第二步:臨用前取出試劑,溶解或者恢復(fù)至室溫,以待使用。
    第三步:選擇差異大的2-3個樣本進行研磨提取,取上清液備用。
    第四步:根據(jù)說明書操作步驟進行預(yù)實驗。
    第五步:待預(yù)實驗確定好樣本檢測濃度、調(diào)整情況后,再批量進行正式實驗。
5、分光法(F)與微板法(W)的區(qū)別
    F:指分光法;W:指微板法;
    分光法是指使用紫外可見分光光度計或可見分光光度計檢測,分光法試劑盒(貨號中帶“F”),需要使用石英或玻璃比色皿;其規(guī)格是:光徑:1cm,容積:1mL, 狹縫寬:3mm
    微板法指使用全波段連續(xù)酶標(biāo)儀檢測。微板法試劑盒(貨號中帶“W”),需要使用96孔酶標(biāo)板或UV板,其規(guī)格是:U型底或平底、最大孔容量300μL
6、普通酶標(biāo)板與UV板的區(qū)別?
    使用酶標(biāo)儀檢測時,如果波長大于等于340nm,使用普通的96孔板;但是波長小于340nm時,需要使用UV板(紫外酶標(biāo)板);UV板(PS聚苯乙稀石英底)價格比較貴,但是可以清洗,重復(fù)使用。一般建議重復(fù)使用3-5次;
    最終測定的反應(yīng)液為有機試劑時(乙酸乙酯、四氫呋喃等有機試劑),避免使用聚苯乙稀材質(zhì)的96孔板。
7、分光法與微板法試劑盒能混用嗎?
    不可以。兩者原理幾乎一樣,但因反應(yīng)體系、樣本用量、試劑濃度、儀器和耗材都不同,并且混用后結(jié)果的準(zhǔn)確性不能保證,不建議混用與任意改變體系。
8、市面上見到的50T/48S;100T/96S;120T/100S是什么意思?
     T:指測試(Test)次數(shù);在實驗室中,這通常指的是反應(yīng)孔;每個反應(yīng)孔可以是一個實驗樣本,或者對照;并不代表測的樣本個數(shù)。50T是50個反應(yīng)孔,不一定代表測50個樣本; 100T、120T也是如此;
S:指可以測試的樣本(Sample)個數(shù);48樣、96樣:指可以檢測48個樣本、96個樣本(不含重復(fù))即得到48個、96個數(shù)據(jù)結(jié)果
9、官網(wǎng)上試劑盒規(guī)格標(biāo)注的“48樣”、“96樣”是什么意思呢?
    “48樣”、“96樣”是試劑盒規(guī)格,我們定義了試劑盒可以測多少樣,對于試劑盒需要的試劑量都給足的;一般會給到超出需用量的10-20%。
    48樣、96樣:指可以檢測48個樣本、96個樣本(不含重復(fù))即得到48個、96個最終的數(shù)據(jù)結(jié)果。格銳思生物的試劑盒48樣可以測不少于50個樣本;96樣指可以測定不少于100個樣本。
10、標(biāo)準(zhǔn)曲線是否需要重新做?
    一般不建議重新做標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制會損耗試劑量,不夠測到試劑盒規(guī)格的樣本數(shù)量,另外我們的標(biāo)準(zhǔn)曲線是可以溯源,保證標(biāo)曲的客觀、真實、科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn),可以直接使用。
    a、格銳思針對需要標(biāo)曲曲線的指標(biāo),給了標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,同時給了標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,以證實我們的標(biāo)曲是客觀做出來的,不是理論推導(dǎo)的。
    b、格銳思同時給了標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的實驗的步驟,客戶對標(biāo)曲有疑問的話,可以按照我們步驟,重新做標(biāo)曲。
    c、格銳思根據(jù)標(biāo)曲推導(dǎo)出最終的計算公式,客戶只需要測出吸光值差值與樣本重量就可以帶入計算。
11、什么是冰浴勻漿?
    (1)使用研缽勻漿:將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿。稱取樣本置于研缽中,研缽和提取液提前預(yù)冷或?qū)⒀欣徶糜谒楸⒈猩?,加入一半量的提取液研磨均勻,轉(zhuǎn)移至離心管中,再向研缽中加入另一半量的提取液涮洗研缽,轉(zhuǎn)移至同一離心管中合并;
    (2)使用勻漿機進行勻漿:先把研磨模塊提前放到-20℃預(yù)冷;然后將稱好的組織放入離心管中,加入適量預(yù)冷的提取液、鋼珠,按照勻漿機要求設(shè)定參數(shù),進行研磨,動物植物組織都可以,對于纖維含量高,難磨樣本可以提高赫茲和延長時間?;蛘叨啻畏磸?fù)研磨
    (3)使用液氮研磨后勻漿:樣本液氮研磨成粉后,加入提取液再次按照(1)、(2)的方式研磨,或者放入超聲波清洗儀300W超聲5min,超聲全程溫度不得超過10℃。
12、樣本的保存
    測常規(guī)指標(biāo),樣本保存在-80℃下,一年以上都可以測;保存在-40℃下,半年之內(nèi)都可以測;保存在-20℃下,三個月都沒問題。

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