一、植物激素的研究意義
植物激素(Phytohormone)亦稱(chēng)植物天然激素或植物內(nèi)源激素。是指植物體內(nèi)產(chǎn)生的一些微量而能調(diào)節(jié)(促進(jìn)、抑制)自身生理過(guò)程的有機(jī)化合物。已知植物體內(nèi)產(chǎn)生的激素有六大類(lèi),即生長(zhǎng)素、赤霉素、細(xì)胞分裂素、脫落酸、乙烯和油菜素甾醇;最近新確認(rèn)的植物激素有多胺,水楊酸類(lèi),茉莉酸(酯)等等。
植物激素是植物感受外部環(huán)境變化,調(diào)節(jié)自身生長(zhǎng)狀態(tài)、抵御不良環(huán)境及維持生存必不可少少的信號(hào)分子,對(duì)于調(diào)節(jié)植物的各種生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程和環(huán)境的應(yīng)答具有十分重要的意義,并且不同植物激素直接存在一定的互助關(guān)系。
二、不同植物激素與研究方向的關(guān)系
結(jié)合我司給客戶(hù)代測(cè)的總結(jié),我們總結(jié)出來(lái)以下幾個(gè)研究方向與關(guān)聯(lián)指標(biāo):
?水楊酸、水楊酸甲酯、茉莉酸、茉莉酸甲酯:用于抗蟲(chóng)、抗病等生物脅迫。
?水楊酸、脫落酸、乙烯前體(ACC)、赤霉素:用于抗旱、耐鹽、抗寒冷等非生物脅迫
?吲哚乙酸、脫落酸、細(xì)胞分裂素、赤霉素、油菜素內(nèi)脂:用于植物生長(zhǎng)發(fā)育,包含分化、成熟衰老、凋亡等
?茉莉酸、赤霉素、脫落酸、生長(zhǎng)素:用于種子萌發(fā)與休眠
三、植物激素檢測(cè)一般有哪些檢測(cè)方法呢
目前植物激素測(cè)試方法有三類(lèi):酶聯(lián)免疫法即ELISA法;高效液相色譜法(HPLC法);液相與質(zhì)譜聯(lián)用方法(LC-MS/MS法)
Elisa法是最為簡(jiǎn)便,檢測(cè)周期短,檢測(cè)單價(jià)更實(shí)惠,但是數(shù)據(jù)精度低于后兩種方法,但是其優(yōu)勢(shì)在于適合大田試驗(yàn)篩選,樣本數(shù)量很多,經(jīng)費(fèi)有限下,可以是實(shí)現(xiàn)快速、節(jié)約經(jīng)費(fèi)。但是目前高水平期刊對(duì)于測(cè)定激素采用ELISA法,認(rèn)可度越來(lái)越低。并且ELISA法對(duì)于檢測(cè)含量較高的激素比如IAA、ABA比較適合,其他含量低的激素檢測(cè)就受到限制。
HPLC法檢測(cè)靈敏度高于ELISA方法,它適合的激素指標(biāo)比較多,比如IAA,ABA、SA等,而對(duì)于GA、JA、BR等低含量的激素是不能精確檢測(cè)出來(lái)或者檢測(cè)不到。
LC-MS/MS 該方法充分結(jié)合了液相的分離能力與MS的強(qiáng)定性能力,檢測(cè)精確度可達(dá)Pg級(jí)別,定性與定量的精確度更好,數(shù)據(jù)精確度滿(mǎn)足目前國(guó)內(nèi)外期刊要求,適合對(duì)數(shù)據(jù)要求精確度高的客戶(hù),并且基本現(xiàn)有激素都能檢測(cè)。
四、常見(jiàn)測(cè)試中的一些問(wèn)題
1、植物激素的游離態(tài)與結(jié)合態(tài)之說(shuō)?
有些植物激素并不是單一形態(tài)存在,常以?xún)煞N狀態(tài)存在與植物體內(nèi),一種是游離態(tài),一種是結(jié)合態(tài),兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)上區(qū)別在于是否有共價(jià)鍵結(jié)合的小分子,帶小分子的為結(jié)合態(tài),若無(wú)則為游離態(tài)。小分子結(jié)合不僅改變了激素的化學(xué)結(jié)構(gòu),并且在多數(shù)情況下導(dǎo)致激素活性下降,以至完全失活。所以對(duì)于有兩種形態(tài)的激素,我們實(shí)際是測(cè)具有有生理活性狀態(tài)--游離態(tài)激素。
實(shí)際測(cè)試過(guò)程中,客戶(hù)指定測(cè)哪種激素,我們用該激素標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)定性、定量。
2、為什么所有激素指標(biāo)不能一起測(cè),要同類(lèi)測(cè)或者一個(gè)個(gè)測(cè)?
植物激素不同與糖、蛋白質(zhì)含量高,在植株內(nèi)激素含量極低的,因此要精確決定定量,前處理是至關(guān)重要的步驟之一,不同的激素指標(biāo)前處理方法不同,特別是一些含量pg級(jí)別的激素,必須經(jīng)過(guò)特殊的前處理,并排除基質(zhì)效應(yīng)的影響,才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。
3、植物激素為什么會(huì)出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果或預(yù)期不符合或者相差很大,或者甚至相反?應(yīng)該如何避免?
1)、取樣的關(guān)鍵性:植物激素在植物樣本中含量極低,植物不同部位的細(xì)胞中激素本身變化很大,樣本均一性難控制;所以盡量采集相同處理的相同部位;同時(shí)采集過(guò)程中,相當(dāng)于對(duì)植物 進(jìn)行了傷害脅迫,會(huì)引起植物應(yīng)激反應(yīng);
2)、存儲(chǔ)條件的影響:植物激素處于不斷的轉(zhuǎn)移與代謝變化中,樣本存儲(chǔ)時(shí)間過(guò)久,反復(fù)凍融、運(yùn)輸干冰不夠等,也會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。
因此、建議大家要采集要取樣時(shí)間一致,取樣生理部位統(tǒng)一、取樣后立即用液氮速凍,然后進(jìn)行超低溫保存。運(yùn)輸過(guò)程使用充足的干冰運(yùn)輸。