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目的

規(guī)范生化酶活及含量檢測(cè)中細(xì)胞樣本的采集、儲(chǔ)存等操作規(guī)范。

適用范圍

適用于生化酶活及含量檢測(cè)中細(xì)胞樣本的采集及儲(chǔ)存。

操作流程

（1）材料準(zhǔn)備

（2）細(xì)胞樣本可分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞，兩種類型細(xì)胞樣本采集方法如下：

貼壁細(xì)胞：

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，去掉培養(yǎng)液，用適量預(yù)冷 PBS 清洗兩遍，再加入少量PBS，用細(xì)胞鏟刮下細(xì)胞，置于1.5 mL 離心管中，在1000 g，4℃離心 1 min，液氮淬滅。

懸浮細(xì)胞：

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞液，在1000 g，4℃離心 1 min，去掉培養(yǎng)液，使用預(yù)冷PBS 清洗細(xì)胞兩遍，置于1.5 mL離心管中，在1000g離心1 min，液氮淬滅。

（3）收集 收集的細(xì)胞即可用于細(xì)胞內(nèi)代謝酶活及物質(zhì)分析，上清液可用于細(xì)胞外代謝酶活及物質(zhì)分析。

（4）儲(chǔ)存 所有樣本均做好標(biāo)記，儲(chǔ)存于液氮或-80℃冰箱中。

樣本量要求細(xì)胞樣本量≥10⁷ /指標(biāo)

儲(chǔ)存及運(yùn)輸

樣本應(yīng)儲(chǔ)存于液氮或-80℃冰箱中。運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)全程保持低溫，建議使用干冰冷凍運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

（1）材料準(zhǔn)備 凍存管、離心管、槍頭等材料必須保持無(wú)菌，避免污染。

（2）快速原則 請(qǐng)務(wù)必提前設(shè)計(jì)準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)和材料，快速取樣和預(yù)處理。

（3）低溫原則 在采集、處理及運(yùn)輸過(guò)程中，請(qǐng)全程保持低溫。

（4）一致性原則 在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和取樣的過(guò)程中，保持一致性。

a)設(shè)計(jì)一致性，不同樣品除了需研究的內(nèi)容不一致，其它都保持一致；

b)時(shí)間一致性，采樣時(shí)間應(yīng)控制在同一時(shí)間范圍內(nèi)；

c)預(yù)處理一致性，即所有樣品的預(yù)處理方法、試劑等均保持一致。

（5）采集過(guò)程中需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，數(shù)量為≥10 ⁷ /指標(biāo)，務(wù)必保持樣本量的一致。

（6）操作過(guò)程中要保證細(xì)胞完整性，避免細(xì)胞內(nèi)代謝物外漏。

（7）樣本編號(hào)一定要清楚、牢固，防止在冷凍過(guò)程中編號(hào)丟失。